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微生物法測(cè)定泛酸的方法步驟

更新時(shí)間:2018-05-18  |  點(diǎn)擊率:2053

泛酸是輔酶ACoA)和?;d體蛋白(ACP)生物合成的重要前體物質(zhì),參與人體中類固醇、褪黑激素、抗體和亞鐵血紅素的合成,是維持生命正常生理機(jī)能的必需小分子有機(jī)物,也是嬰幼兒乳粉中重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

 

目前的兩種方法——微生物法和液相色譜法都可以用于檢測(cè)奶粉等嬰幼兒食品中的泛酸,結(jié)果具有可比性。微生物法法測(cè)定泛酸含量靈敏度高,其標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)、回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差方面,檢測(cè)結(jié)果都較好。而液相色譜法檢測(cè)速度較慢、成本較高,所以采用微生物法進(jìn)行大量樣本的測(cè)定,被美國(guó)AOAC所推薦,也是我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法的仲裁法。

 

該方法操作步驟較多,微生物生長(zhǎng)的不確定性強(qiáng)也會(huì)影響結(jié)果。注意這些可能存在的影響因素,可以保證測(cè)量結(jié)果的穩(wěn)定和準(zhǔn)確。有人研究發(fā)現(xiàn),對(duì)泛酸檢驗(yàn)結(jié)果影響zui大的是試樣前處理(存在泛酸損失)及稀釋(包括容量瓶、吸量管、量筒等玻璃器具的校準(zhǔn)和室溫對(duì)液體體積的影響,其次是標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。另一項(xiàng)研究則發(fā)現(xiàn),是微生物因素引起的吸光度曲線偏離線性影響zui大,因此建議在日常監(jiān)測(cè)中,減少微生物培養(yǎng)環(huán)境因素的波動(dòng),對(duì)培養(yǎng)環(huán)境實(shí)時(shí)更嚴(yán)格的控制。

 

關(guān)于微生物法測(cè)泛酸的精密度,有人對(duì)14個(gè)嬰兒配方奶粉的泛酸含量進(jìn)行了測(cè)定,進(jìn)行了28次相對(duì)誤差和20次回收率的觀察,發(fā)現(xiàn)75%的結(jié)果相對(duì)誤差都<10%,回收率有80%在90~110%之間,說(shuō)明該方法用于檢測(cè)奶基嬰幼兒食品是可行的。

又有研究發(fā)現(xiàn),標(biāo)準(zhǔn)曲線在0~50ng/ml范圍內(nèi),線性關(guān)系較好。同時(shí)提出幾點(diǎn)注意事項(xiàng),要注意無(wú)菌操作;避免菌種污染;玻璃器皿要嚴(yán)格清洗;必要的話,樣本多做幾個(gè)稀釋度的實(shí)驗(yàn);降溫過(guò)程中,要將試管浸入冷水中,使其迅速降溫,避免沉淀和顏色產(chǎn)生;用軟件擬合4次泛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線。

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