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2017年版ISO 22964克羅諾桿菌屬檢測標準解讀

更新時間:2019-05-06  |  點擊率:2160

阪崎克羅諾桿菌名稱經(jīng)歷了數(shù)次變化。早因產(chǎn)生黃色素,被稱為黃色陰溝腸桿菌。后來發(fā)現(xiàn)該菌與陰溝腸桿菌有所不同,又更名為“阪崎腸桿菌”。2008年,Iversen等人通過分子生物學技術(如多位點序列分型即MLST)鑒定,將該菌擴大為屬(克羅諾桿菌屬)。目前,克羅諾桿菌至少有7個種。其中阪崎克羅諾桿菌與人的關系為密切。

 

克羅諾桿菌耐干燥環(huán)境,可在嬰幼兒奶粉、豆粉、營養(yǎng)粉、草本茶、淀粉中存活,在海水中也存在。有報道,在海產(chǎn)干制品中的檢出率可達17.83%。又有人在成都市某城區(qū)超市、農(nóng)貿(mào)市場、食品小吃店中調查,發(fā)現(xiàn)100份食品樣品中有32份樣品分離出克羅諾桿菌,分離率為32%。

 

克羅諾桿菌耐高溫,耐紫外線,能產(chǎn)生生物膜對消毒產(chǎn)生抵抗。同時,阪崎克羅諾桿菌對嬰幼兒的感染致死率高,因此,在嬰幼兒食品和乳品中進行檢測非常重要,我國食品安全國家標準在這方面也有規(guī)定。

 

ISO/TS 22964:2017是上發(fā)布的一版克羅諾桿菌屬檢測標準,它取代了2006年版。主要變動是:將檢測范圍從阪崎克羅諾桿菌擴大至整個克羅諾桿菌屬,樣本包括人類食品、動物飼料和食品生產(chǎn)區(qū)的環(huán)境樣本;mLST肉湯被克羅諾桿菌選擇性肉湯(CSB)所取代;阪崎腸桿菌分離瓊脂被克羅諾桿菌分離顯色瓊脂(CCI)所取代;生化驗證試驗有修正。

 

ISO/TS 22964:2017制訂的克羅諾桿菌屬檢測過程大致為:1. 預增菌。取樣,在緩沖蛋白胨水(BPW)中34℃-38℃培養(yǎng)18h±2h;2. 增菌。轉移0.1ml預增菌液至10ml CSB,混勻。41.5℃培養(yǎng)24h±2h。3.接種。用接種環(huán)接種10ul菌液至克羅諾桿菌顯色培養(yǎng)基(CCI)平板上,41.5℃培養(yǎng)24h±2h。4.挑出典型菌落,在TSA上純培養(yǎng)并進行生化驗證。

 

CCI平板上典型的克羅諾菌落為小至中等大?。?mm~3mm)藍色或藍綠色菌落。非克羅諾菌落則為白色,或白色同時中心為綠色或灰色、黑色。有些非克羅諾菌為黃色或紅色。

 

常見的生化驗證包括氧化酶、賴氨酸脫羧、鳥氨酸脫羧、四種糖發(fā)酵產(chǎn)酸(阿拉伯糖、山梨醇、蔗糖)、

4-硝基苯--D-葡吡喃糖苷的水解。其他如伏普、甲基紅試驗等為可選??肆_諾桿菌屬為氧化酶反應陰性,葡吡喃糖苷的水解和蔗糖發(fā)酵產(chǎn)酸陽性,而賴氨酸脫羧和山梨醇產(chǎn)酸均為陰性。

 

關于克羅諾桿菌選擇性肉湯(CSB),微生物產(chǎn)品供應商HiMedia公司提供有商品化脫水培養(yǎng)基Cronobacter Screening Broth(貨號M1786),1升中加入1管萬古霉素(貨號FD233)制備為*培養(yǎng)基。HiMedia公司也提供有克羅諾桿菌顯色培養(yǎng)基(CCI),其組成和ISO/TS 22964:2017*一致,貨號為M2062I。同時,HiMedia公司也提供有4-硝基苯--D-葡吡喃糖苷,貨號為RM10294-1G,歡迎選購。

 

 

 

圖. 克羅諾桿菌顯色培養(yǎng)基(CCI, 貨號為M2062I)

 

在ISO/TS 22964:2017的附錄3中,還列表列舉了阪崎克羅諾桿菌與其他相似菌的鑒別特征。表中的數(shù)字代表者陽性菌株的比例。其中阪崎克羅諾桿菌與陰溝腸桿菌的區(qū)別在于:4-硝基苯--D-葡吡喃糖苷水解試驗,阪崎克羅諾桿菌(+),陰溝腸桿菌(基本-);山梨醇發(fā)酵,阪崎克羅諾桿菌(-),而陰溝腸桿菌(+),可供檢測人員參考。

 

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