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口腔支原體與肺炎支原體標準品的應用

更新時間:2021-01-06  |  點擊率:829

我國藥典規(guī)定:“主細胞庫、工作細胞庫、病毒種子批、對照細胞以及臨床治療用細胞進行支原體檢查時,應同時進行培養(yǎng)法和指示細胞培養(yǎng)法(DNA染色法)。病毒類疫苗的病毒收獲液、原液采用培養(yǎng)法檢查支原體。”

培養(yǎng)法所用的支原體培養(yǎng)基,在使用前需進行靈敏度檢查,這時需要用到國家藥品檢定機構(gòu)分發(fā)的肺炎支原體(ATCC 15531株)和口腔支原體(ATCC 23714株)。在指示細胞培養(yǎng)法中,它們還可作為陽性對照。

在上,支原體核酸擴增技術(shù)(PCR/qPCR)由于具有操作簡單、節(jié)約時間、靈敏度高、特異性強等優(yōu)勢,越來越多地用于制藥工業(yè)的支原體檢查。但如要替代培養(yǎng)法,其靈敏度需達到10CFU/ml;如要替代DNA染色法,其靈敏度需達到100CFU/ml,以防止發(fā)生漏檢。

為驗證支原體PCR/qPCR法的靈敏度,德國MB公司提供滅活支原體的靈敏度標準品,經(jīng)過10CFU或100CFU嚴格標定,可用于支原體核酸擴增法的方法驗證。

一、產(chǎn)品信息

 


 

 

二、產(chǎn)品特點:

1. 支原體株來自英國菌種保藏中心NCTC。

2. 傳代次數(shù)少,支原體無變異。

3. 產(chǎn)品為凍干粉,保證其穩(wěn)定性。

4. 分析證書(COA)提供該批次GU:CFU比值(支原體基因組/菌落數(shù)比值)。

5. 支原體已滅活,保障細胞實驗室安全。

三、操作步驟

步驟1. 離心,收集標準品凍干粉至管底。

步驟2. 每個管中添加1ml你的樣品基質(zhì)。

步驟3. 室溫孵育5分鐘。

步驟4. 渦旋振蕩10秒,再離心10秒。

步驟5. 繼續(xù)DNA抽提。推薦使用德國MB公司提供的支原體DNA提取試劑盒(英文名:Venor®GeM Sample Preparation Kit,貨號56-1010/-1050/-1200)。

步驟6. 抽提的DNA用于PCR/qPCR擴增。

我國《CAR-T細胞治療產(chǎn)品質(zhì)量控制檢測研究及非臨床研究考慮要點》支原體檢查部分指出:

“選用商品化的檢測試劑,在使用前也需確認其檢出限不低藥典方法。在早期使用時,應與藥典方法平行進行,在獲得充分的比對數(shù)據(jù)后才有可能替代藥典方法。”

以往已有肺炎支原體和口腔支原體標準菌株,用于培養(yǎng)法的靈敏度檢查。但對于PCR/qPCR支原體核酸檢測法,國內(nèi)尚沒有用于靈敏度驗證的支原體菌株標準品。德國MB公司長期專注支原體產(chǎn)品的開發(fā)和支原體的防控,具有二十多年的經(jīng)驗,其所提供的10CFU和100CFU支原體靈敏度標準品被各大藥廠廣泛使用,很好地彌補了這一空白,使得核酸檢測法與培養(yǎng)法可以平行開展和比較結(jié)果,有助于對核酸檢測法進行方法驗證,為廣大藥廠帶來了方便。

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